平時，研究人員細胞的來源有三種，一種是直接從(cong) 商業(ye) 化公司（如ATCC、DSMZ、中科院細胞所）購買(mai) ，另一種為(wei) 自己從(cong) 原代組織分離，還有一種是從(cong) 其他實驗室或科研人員處獲取。

既然如此方便，我們(men) 為(wei) 什麽(me) 要自己建立細胞庫呢？有何意義(yi) ？

細胞庫可以有效保持貯存細胞的生物學效用和功能，為(wei) 科研實驗提供檢定合格、質量穩定、可持續獲得的細胞。

1. 節省實驗室空間、時間、經費
2. 若實驗失敗，還有重來的機會(hui)
3. 確保實驗重複的一致性
4. 確保未來實驗的連貫性
因此實驗室有必要建立一個(ge) 安全、規範、穩定、可追溯的細胞庫，我們(men) 需要從(cong) 源頭保證整個(ge) 研究實驗的規範性。

目前，世界上較權wei的細胞庫機構或者研究院都采用三級細胞庫管理模式，即：原始細胞庫（PCB，Primary Cell Bank），主細胞庫（MCB，Master Cell Bank），工作細胞庫（WCB，Working Cell Bank）。

1. 原始細胞庫（PCB，Primary Cell Bank）

原始細胞庫（PCB，Primary Cell Bank），又名細胞種子（Cell Seed）或初級細胞庫（Pre-master Cell Bank），由一個(ge) 原始細胞群體(ti) 發展成為(wei) 傳(chuan) 代穩定的細胞群體(ti) ，或者經過克隆培養(yang) 形成的均一細胞群體(ti) ，經檢定證明合格。將一定數量、成分均一的細胞懸液定量裝於(yu) 細胞凍存管，與(yu) 液氮或-130℃以下凍存，即為(wei) 原始細胞庫，供建立主細胞庫使用。

2. 主細胞庫（MCB，Master Cell Bank）

主細胞庫（MCB，Master Cell Bank）指的是，原始細胞庫細胞傳(chuan) 代增殖後均勻混合成一批，定量分裝，保存於(yu) 液氮或-130℃以下。這些細胞經檢定合格後，即為(wei) 主細胞庫，供建立工作細胞庫使用。

3. 工作細胞庫（WCB，Working Cell Bank）

工作細胞庫（WCB，Working Cell Bank）是經過主細胞庫傳(chuan) 代增殖，達到一定代次水平的細胞，混合後製成一批均質細胞懸液，定量分裝於(yu) 一定數量的細胞凍存管，保存於(yu) 液氮或-130℃以下備用。這些細胞經檢定證明合格後，即為(wei) 工作細胞庫。

不同的細胞係傳(chuan) 代能力不同，因此，研究人員須根據自己的細胞係確定工作細胞的傳(chuan) 代次數。

▲ 細胞庫建立流程圖

細胞庫的檢定

上麵我們(men) 介紹過在進行各級細胞庫的建立時，都要進行檢定，合格後才可成為(wei) 相應細胞庫。細胞檢定主要包括以下幾個(ge) 方麵：細胞鑒別，細菌、真菌檢查，支原體(ti) 檢查，細胞內(nei) 外源病毒因子檢查，致瘤性檢查，必要時還須進行細胞染色體(ti) 、細胞生長特性、細胞均一度及穩定性檢查。

▽ 細胞檢定項目

在建立這些細胞庫的過程，凍存這個(ge) 操作步驟是非常重要的，必須要遵守“慢凍"原理。

當建立好各級細胞庫後，重要的是要如何進行管理？
細胞庫的管理

研究人員應檢測並維護細胞庫凍存器，以保證細胞庫貯存在一個(ge) 高度穩定的環境中。每種細胞庫均應分別建立台賬，詳細記錄放置位置 ，容器編號，分裝及凍存數量，取用記錄等。細胞庫中的每支細胞凍存管均應具有細胞係/株名、代次、編號、凍存日期、貯存容器編號等信息。

▽ 細胞係記錄表

為(wei) 保證細胞凍存後仍具有良好的活力，每建立一級細胞庫，凍存前的細胞活力應不低於(yu) 90%，凍存後應取一定量的（可代表凍存全過程）凍存管，複蘇細胞進行檢測，複蘇後細胞的活力應不低於(yu) 80%。一般細胞凍存2-3天溫度趨於(yu) 穩定後，即可進行細胞活力檢測。

▽ 細胞複蘇記錄表

那麽(me) 我們(men) 在建立細胞庫的時候，應該如何確定凍存數量和凍存密度呢？

原始細胞庫、主細胞庫和工作細胞庫凍存多少數量，可根據自己的需要確定，隻要滿足後續科研實驗需求即可，即遵循“夠用原則"。一般經驗來說，凍存的細胞密度為(wei) 1-10×10⁶ cells/ml，凍存體(ti) 積1-1.5 ml/管。

一些細胞冷凍保存細胞密度 ：

1. Normal human fibroblast（人成纖維細胞）：1-3×10⁶ cells/ml。
2. Hybridoma（雜交瘤細胞）：1-3×10⁶ cells/ml。
3. Adherent tumor lines（貼壁腫瘤細胞係）：5-7×10⁶ cells/ml，依細胞種類而異。Adenocarcinoma（腺癌細胞）解凍後須較高之密度，而HeLa隻需要1-3×10⁶ cells/ml。
4. Other suspensions（懸浮細胞）：5-10×10⁶ cells/ml。
5. Human lymphocyte（人淋巴細胞）：至少5×10⁶ cells/ml。