試劑空白:
試劑空白是指由於(yu) 測試試劑本身而帶來的測試結果的微小的正誤差。由於(yu) 生化測試測量的吸光度為(wei) 相對吸光度,所以從(cong) 理論上說,所有終點法的測試都需要把試劑本身的吸光度扣除。試劑本身的吸光度就是試劑空白。測量方法是按照正常測試的試劑和樣本量,把樣本換成蒸餾水來測量。
測試試劑的空白值對於(yu) 一項測試尤為(wei) 重要,當進行低濃度測定時應該從(cong) 測試結果中扣除測試試劑的空白值。例如,如果從(cong) 0.06mg/L的低濃度測試結果中減掉0.02mg/L的試劑空白值,就會(hui) 使最終測定結果改變至少30%。而從(cong) 1.23mg/L的高濃度測試結果中減掉0.02mg/L的試劑空白值,最終測定結果隻發生了2%的變化。
測定試劑的空白值時,需要使用高質量的去離子水代替待測樣品,加入測試試劑,按照操作步驟,進行常規測試。然後,從(cong) 樣品的測定結果中減去測試試劑的空白值。不同批次的測試試劑其空白值會(hui) 有所變化,所以,當使用不同批次的測試試劑時,需要重新對它的空白值進行測定。
在傳(chuan) 統手工方法中,每次測定都要做至少三個(ge) 管:測定管、標準管、空白管。其中空白管是試劑加蒸餾水,測出來也就是試劑空白。因為(wei) 操作環境、儀(yi) 器狀態、試劑穩定性等變異,所以要求每次都要測定試劑空白,稱為(wei) 實時試劑空白。
在全自動分析儀(yi) 上,大體(ti) 上是模擬手工操作。但許多全自動分析儀(yi) 為(wei) 追求速度,在設計上采用一些折中方法來測定試劑空白。有些全自動分析儀(yi) 是做不了實時試劑空白,因為(wei) 它們(men) 全是先加入樣本後加試劑。為(wei) 了折中,隻好在定標時做一個(ge) 試劑空白保存起來,需要扣除試劑空白時再減這個(ge) 預先保存的值。這種做法,對於(yu) 比較穩定的試劑來講,對結果影響不大。
總的說來,自動生化儀(yi) 上的試劑空白一般表現為(wei) 零點吸光度,該吸光度是通過校準確立的。
樣本空白:
樣品空白是指在某項測試程序中,使用某個(ge) 樣品的濃度作為(wei) 儀(yi) 器的零基準。樣品空白可以抵消加入測試試劑前由於(yu) 樣品自身存在的色度或濁度而引起的正誤差。由於(yu) 溶血、脂血、黃疸等情況,會(hui) 導致樣本本身的吸光度對測試結果造成影響。所以對樣本本身吸光度的測量,即樣本空白,可以去除這方麵的影響。測量方法是按照正常測試的試劑和樣本量,把試劑換成蒸餾水或生理鹽水來進行測量。自動生化儀(yi) 上,很難界定樣本空白。與(yu) 消除樣本空白有關(guan) 的大約有如下幾點:
a).在雙試劑測定時,加入試劑1和樣品後的吸光度可一定程度上扣除樣本空白,所以有單試劑不能扣除樣本空白的說法。
b).現在優(you) 質的試劑的抗幹擾能力都比較強,比如有些雙試劑,R1加入後先和樣本孵育一段時間,將血紅蛋白、脂肪、膽紅素等反應掉,再加入R2開始測定反應。在一定範圍內(nei) 都可以消除樣本空白。
c).現代全自動生化儀(yi) 大多采用雙波長測定。雙波長測定的原則是根據幹擾組分和待測物質吸收光譜的峰形特征,選擇兩(liang) 個(ge) 波長和。使幹擾組分在這兩(liang) 個(ge) 波長處的吸光係數相等,而使待測物質在兩(liang) 波長處的吸光係數有顯著差別。以兩(liang) 波長分別測定分析溶液的吸光度,以兩(liang) 個(ge) 吸光度值之差(△A)計算。這也可以扣除一部分樣本空白。
d).有些儀(yi) 器有專(zhuan) 門的“血清信息"功能的設置。做法都是單獨占用一個(ge) 空白通道來計算,這也叫做樣品空白校準。
在使用樣品空白對測試儀(yi) 器進行調零後,隻有樣品與(yu) 測試試劑發生反應而產(chan) 生的色度被測定了。由於(yu) 樣品的背景色度和濁度往往各不相同,樣品空白經常用來對儀(yi) 器進行調零。
試劑空白和樣品空白的空白概念區別要點:**空白=隻含**的空白(吸光度)
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