一、儲(chu) 存條件
血清一般儲(chu) 存於(yu) -20℃,同時應避免反複凍融。若存放於(yu) 4℃時,請勿超過一個(ge) 月。
二、血清中絮狀沉澱的處理
沉澱包含纖維蛋白和脂蛋白,這是正常特性,不會(hui) 影響產(chan) 品性質。
離心血清(400g,1-2分鍾)或簡單的讓其沉澱在瓶子底部,將血清小心的轉移到另一個(ge) 無菌瓶裏。
大多情況輕輕搖動沉澱並加熱至37℃就會(hui) 再溶解。
一般不建議采用過濾的方法除去沉澱,因為(wei) 沉澱會(hui) 堵塞濾膜而無法過濾。
三、使用濃度
一般為(wei) 5-20%,常用是10%。過多血清容易使培養(yang) 中的細胞發生變化,特別是一些二倍體(ti) 的無限細胞係,迅速生長之後容易發生惡性轉化。
四、解凍方法
血清從(cong) 冰箱取出後應慢慢地解凍。zh在4℃低溫冰箱裏放置一天或直到*融化為(wei) 止。如果時間不允許低溫解凍, 可參考以下解凍方法:
1. 將血清從(cong) 冰箱裏取出後,在室溫下放置15-20分鍾。
2. 然後將血清放置在37℃水浴槽裏。過高溫度會(hui) 導致血清出現渾濁現象。不要讓水淹沒裝有血清的瓶子。
3. 每隔5分鍾左右適當搖晃瓶子,直到*地解凍為(wei) 止。
五、熱滅活方法
加熱可以滅活補體(ti) 係統。激活的補體(ti) 參與(yu) 溶解細胞事件,刺激平滑肌收縮,細胞和血小板釋放組胺,激活淋巴細胞和巨噬細胞。在免疫學研究,培養(yang) ES細胞、平滑肌細胞時,推薦使用熱滅活血清。若必須做血清的熱滅活,請遵守56℃,30分鍾的原則,並且隨時搖晃均勻。血清的熱滅活非常容易造成沉澱物的增多,若非必要,可以無須做此步驟。
1. 用上述描述的方法將血清在低溫冰箱或室溫下解凍。
2. 在血清解凍時,將一個(ge) 容器裝入適量的水,用於(yu) 模擬裝有血清瓶子在熱處理過程中檢測瓶內(nei) 水的溫度。容器大小、質地和裝水的量zh與(yu) 裝血清的瓶子相同或相似。
3. 待血清*解凍時,將含有血清的瓶子放在預熱的56℃水浴裏,不要將含有血清的瓶子讓水淹沒或接近瓶子的蓋子,以免導致汙染。
4. 在開始加熱處理時,要及時使用溫度計測定模擬瓶內(nei) 水的溫度。
5. 在預熱期間,每隔3-5分鍾要適當搖晃含有血清和水的瓶子,確保瓶內(nei) 液體(ti) 均勻加熱。
6. 一旦模擬瓶內(nei) 的水溫達到55.8±0.5℃時,開始計時,並在此溫度範圍內(nei) 熱處理30分鍾,然後立即放在冰上冷卻。
為(wei) 防止在熱處理過程中由蛋白質變性而導致的渾濁和沉澱現象,熱處理時應注意下列事項:
1. 不要用高於(yu) 25℃以上的溫度加快解凍速度。
2. 在熱處理之前,要使血清*融解。
3. 不要使熱處理的溫度高於(yu) 56.3℃
4. 熱處理時間不要長於(yu) 30分鍾。
5. 在加熱過程中一定要定時搖動血清。
六、避免事項
1.避免反複凍融
長時間儲(chu) 存在2-8℃時,血清中的各種蛋白和脂蛋白可能聚集而形成沉澱或可見的混濁。
2.避免產(chan) 生沉澱
解凍血清時,請隨時將之搖晃均勻,使溫度及成分均一,減少沉澱的發生。
血清分裝時,須規則搖晃均勻(小心勿造成氣泡),使溫度與(yu) 成分均一。
勿直接由-20℃直接至37℃解凍,因溫度改變太大,容易造成蛋白質凝結而發生沉澱。
勿將血清置於(yu) 37℃太久,否則血清會(hui) 變得渾濁,同時血清中許多較不穩定的成份也會(hui) 因此受到破壞,從(cong) 而影響血清的品質。
七、建議事項
一旦您在新鮮培養(yang) 基中添加了血清和抗生素時,您應該在兩(liang) 到三周內(nei) 使用它。因為(wei) 一些抗生素和血清中的基本成分在解凍後就開始降解。(100U/mL青黴素;100µg/mL鏈黴素)
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