說到星空体育官网网页登陆,我們(men) 先說說絕對定量:絕對定量是指在實時熒光定量PCR實驗中,對已知量的樣本進行連續稀釋後擴增,生成標準曲線。然後通過與(yu) 此曲線比較,定量未知樣本,絕對定量可測定靶點的實際拷貝數。包括以下三個(ge) 步驟:
(1)將星空体育官网网页登陆稀釋成不同濃度,作為(wei) 模板進行擴增;
(2)以星空体育官网网页登陆拷貝數的對數值為(wei) 橫坐標,以測得的Ct值為(wei) 縱坐標繪製標準曲線;
(3)根據未知樣品的Ct值,即可在標準曲線中獲得樣品的拷貝數。
以上可以看出星空体育官网网页登陆之於(yu) 絕對定量是非常非常重要的,那麽(me) 星空体育官网网页登陆該怎樣選擇?
在GB/T22554-2010《基於(yu) 標準樣品的線性校準》中注明標準樣品的組分需要與(yu) 被測樣品組分一致。
星空体育官网网页登陆 既可以是含有目的基因的線性化質粒DNA,也可以是比目的基因擴增片段長的純化後的PCR產(chan) 物,或者基因組DNA和cDNA,但是需要作為(wei) 星空体育官网网页登陆的核酸必須保證穩定並且需要精準定量。並且由於(yu) 核酸提取、逆轉錄等實驗過程可能會(hui) 影響反應結果,所以需要注意星空体育官网网页登陆的實驗步驟應與(yu) 實驗樣品盡可能相同。常用星空体育官网网页登陆包括:
DNA星空体育官网网页登陆
純化的PCR擴增片段或含有目的基因的克隆質粒。
優(you) 點:易製備,儲(chu) 存穩定;
缺點:缺少逆轉錄反應過程。
RNA星空体育官网网页登陆
目的基因的體(ti) 外轉錄RNA。
優(you) 點:結合逆轉錄反應過程;
缺點:製備時間長,不穩定。
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